Panatilihing MALIGO sila! Ang proseso ng paggawa ng mga karampatang cell ay mahirap dahil sa pangangailangan para sa mga cell na manatiling malamig. Ito ay mahalaga dahil ang mga cell ay napakasensitibo at marupok habang ginagawa silang karampatang Ang pagpapanatiling mababa ang temperatura ay nakakatulong upang maiwasan ang pagkamatay ng cell habang pinoproseso.
Bakit pinananatili sa yelo ang mga reaksyon sa panahon ng eksperimento sa pagbabago?
Ang pinaghalong plasmid-cell ay panandaliang pinainit hanggang 45–50°C, na nagpapahintulot sa DNA na makapasok sa cell sa pamamagitan ng nasirang lamad. Ang pinainit na timpla ay ilalagay muli sa yelo upang mapanatili ang mga plasmid sa loob ng bakterya … Kung ang solusyon ng plasmid DNA ay may labis na asin sa loob nito, maaaring mangyari ang arcing, na makompromiso ang pagbabago.
Bakit mo inilalagay ang mga tubo sa yelo?
Bakit sa tingin mo ay inilalagay namin ang mga tubo sa yelo? Para maipasok ang DNA sa bacteria, kailangan nating butasin ang mga ito gamit ang kemikal na calcium chloride (CaCl2). … Ang mga butas ay tumusok upang payagan ang DNA sa pag-iwan ng bakterya na tumutulo. Kung hindi natin sila ilalagay sa yelo, sila ay 'dumugo' hanggang mamatay.
Ano ang papel ng ice cold calcium chloride sa paghahanda ng mga karampatang cell?
Ang proseso ng calcium chloride heat-shock transformation ay hinihikayat ang mga bacterial cell na kunin ang DNA mula sa nakapalibot na kapaligiran. … Ang malamig na CaCl2 solution na ay pinapadali ang pagbubuklod ng DNA sa ibabaw ng cell, na pagkatapos ay pumapasok sa cell pagkatapos ng maikling panahon ng heat- shock (3).
Paano ka nag-iimbak ng mga karampatang cell?
Dapat na nakaimbak ang mga karampatang cell sa - 80°C. Ang imbakan sa -20°C ay magreresulta sa makabuluhang pagbaba sa transformation efficiency (TE). Kapag sinubukan sa NEB 5-alpha Competent E. coli (NEB C2987H), nawala ang mga cell ng 94.5% ng TE pagkatapos lamang ng 24 na oras na imbakan sa -20°C.
