Mga alituntunin para sa pagtunaw ng mga cell
- Mabilis na lasaw ang mga nagyelo na cell (< 1 minuto) sa 37°C water bath.
- Dlute ang mga natunaw na cell nang dahan-dahan bago mo i-incubate ang mga ito, gamit ang pre-warmed growth medium.
- Plate thawed cells sa mataas na density para ma-optimize ang pagbawi.
- Palaging gumamit ng wastong aseptic technique at magtrabaho sa isang laminar flow hood.
Bakit tapos na ang pagtunaw ng mga cell?
Mahalagang matunaw nang tama ang mga cell upang mapanatili ang viability ng ang kultura at paganahin ang kultura na mabawi nang mas mabilis. Ang ilang cryoprotectants, gaya ng DMSO, ay nakakalason sa itaas ng 4 °C. Samakatuwid, mahalaga na ang mga kultura ay mabilis na lasaw at natunaw sa medium ng kultura upang mabawasan ang mga nakakalason na epekto.
Ano ang proseso ng lasaw?
Ang
Thawing ay ang proseso ng pagkuha ng frozen na produkto mula sa frozen hanggang sa temperatura (karaniwan ay higit sa 0°C) kung saan walang natitirang yelo, ibig sabihin, “defrosting”. Ang lasaw ay kadalasang itinuturing na simpleng pagbabalikwas ng proseso ng pagyeyelo.
Ano ang pinakamahusay na paraan upang i-freeze ang mga cell?
I-freeze ang mga cell nang dahan-dahan sa pamamagitan ng pagbabawas ng temperatura sa humigit-kumulang 1°C kada minuto gamit ang isang controlled rate cryo-freezer o isang cryo-freezing container gaya ng “Mr. Frosty,” makukuha mula sa Thermo Scientific Nalgene labware (Nalge Nunc). Palaging gamitin ang inirerekomendang medium sa pagyeyelo.
Paano mo latunawin ang isang pangunahing cell?
Punasan ang labas ng vial ng mga cell na may 70% ethanol o isopropanol. Sa isang biosafety cabinet, i-twist ang takip sa isang quarter-turn upang maibsan ang panloob na presyon at pagkatapos ay muling higpitan. Mabilis na lasawin ang mga cell sa 37°C water bath sa pamamagitan ng dahan-dahang pag-ikot sa vial. Alisin ang vial kapag may natitira pang kaunting yelo.
